Visión general del inmunodiagnóstico
1. Concepto básico
(1) anticuerpos (Ab) y antígenos (Ag)
Anticuerpo: se refiere a la proteína protectora producida por el cuerpo debido a la estimulación del antígeno, secretada por las células B efectoras en los vertebrados, que se puede dividir en IgG, IgM, IgA, IgD, E IgE. IgG es el isotipo con el mayor contenido en suero y fluidos corporales, lo que representa de 75% a 80%. El anticuerpo IgG es principal producido por la respuesta inmune secundaria, la "fuerza principal" de la antiinfección del cuerpo y el anticuerpo más utilizado en el inmunodiagnóstico.
Antígeno: se refiere a una sustancia que puede causar la producción de anticuerpos y cualquier sustancia que pueda inducir una respuesta inmune en el organismo. Los antígenos son extraños, macromoleculares y específicos. La especificidad de un antígeno significa que un antígeno Solo puede unirse al anticuerpo correspondiente o células T efectoras, que los grupos químicos determinan en la superficie de la molécula, llamados determinantes antigénicos. El peso molecular del antígeno es generalmente> 10kDa, y cuanto mayor es el peso molecular, más fuerte es la antigenicidad.
(2) anticuerpos policlonales y anticuerpos monoclonales
Anticuerpo policlonal: las moléculas de antígeno natural a menudo contienen una variedad de epítopos antigénicos diferentes, estimulando el sistema inmune del cuerpo con este antígeno puede activar una variedad de clones de células B al mismo tiempo, Y los anticuerpos resultantes contendrán una variedad de anticuerpos contra diferentes epítopos, por lo que se denominan anticuerpos policlonales.
El anticuerpo monoclonal es un anticuerpo altamente homogéneo producido por un clon de una sola célula B que solo se dirige a un Epítopo específico. Típicamente se prepara usando tecnología de hibridoma. Las células efectoras B y las células de mieloma se fusionan para formar hibridomas de células B. Un anticuerpo monoclonal puede producir cultivando una sola célula de hibridoma en una población de células específicas para un epítopo. La afinidad y especificidad de los anticuerpos monoclonales son generalmente mejores que las de los anticuerpos policlonales.
(3) anticuerpos recombinantes y antígenos recombinantes
Anticuerpo recombinante: un anticuerpo modificado genéticamente es un anticuerpo producido in vitro utilizando tecnología de recombinación génica y tecnología de ingeniería de proteínas. Obtener la secuencia génica del anticuerpo, construir un vector de expresión y transferirlo a un huésped de expresión (como levadura, células de insecto, células de mamífero o bacterias). De esta manera, la producción de anticuerpos se libera de las limitaciones del sistema inmune. Al mismo tiempo, pueden producir anticuerpos de longitud completa y varios fragmentos de anticuerpos.
Antígenos recombinantes: En general, los antígenos recombinantes se refieren a proteínas recombinantes en esencia y también son proteínas producidas in vitro por tecnología de recombinación génica y tecnología de ingeniería de proteínas.
2. Principios de inmunodiagnóstico
(1) Método de sándwich de anticuerpo monoclonal Doble
Método sándwich de anticuerpo monoclonal doble: use un portador de fase sólida para recubrir un anticuerpo y marque otro anticuerpo marcado para detectar el antígeno que se va a probar, Y luego formar un complejo de Ab recubierto marcado con ab-ag. Este método detecta principalmente sustancias antigénicas.
Crédito de la imagen: https://www.rockland.com/resources/elisa-technique/
(2) método indirecto
Método indirecto: un método de detección en el que se utiliza un portador en fase sólida para inmovilizar el antígeno y marcar el anticuerpo secundario. Este método se utiliza principalmente para detectar Anticuerpos IgG en muestras. Se forma un complejo del Ab secundario marcado con ag-diana recubierto para detectar el anticuerpo en la muestra.
Crédito de la imagen: https://www.rockland.com/resources/elisa-technique/
(3) método de captura
Método de captura: un método de detección en el que se utiliza un portador en fase sólida para recubrir el anticuerpo secundario y otra cepa de antígeno marcado para detectar el anticuerpo. Se forma y se prueba un complejo de la Ag marcada con Ab-diana secundaria recubierta. Este método se utiliza principalmente para detectar IgM en la muestra.
Crédito de la imagen: https://www.rockland.com/resources/elisa-technique/
(4) método de competencia
Método de competición: unión competitiva del anticuerpo recubierto/marcado con el antígeno marcado/recubierto y el antígeno de prueba. Este método se utiliza principalmente para detectar antígenos de moléculas menores.
Crédito de la imagen: https://www.rockland.com/resources/elisa-technique/
Método 1: Cubrir el anticuerpo en la fase sólida, marcar el antígeno, añadir la muestra, el antígeno a probar compite por el sitio de unión del anticuerpo, lavar, dar el resultado
Método 2: Cubrir el antígeno en la fase sólida, marcar el anticuerpo
3. El desarrollo del inmunodiagnóstico
Inmunodiagnóstico aplica teorías, técnicas y medios Inmunológicos para diagnosticar diversas enfermedades y determinar el estado inmunológico. Con el desarrollo de tecnología, se ha sometido a el inmunodiagnóstico inmunoelectroforesis, ensayos de precipitación y aglutinación, radioinmunoensayo, inmunofluorescencia, ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas, inmunoturbidimetría, etiquetado coloidal de oro y microesferas fluorescentes, tiras de membrana de transferencia, quimioluminiscencia, chips de proteínas, tecnología de control de microfluidos y detección de una sola molécula.
(1) ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA)
El ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) es un método de detección que combina el principio de reacción inmunitaria con la tecnología de inmovilización y la tecnología de etiquetado enzimático. Primero, use una placa de múltiples pozos de poliestireno para recubrir el antígeno/anticuerpo, una la sustancia que se analizará en la muestra y agregue peroxidasa de rábano picante (HRP) o fosfatasa alcalina (AP) después del lavado para marcar el anticuerpo/antígeno para formar un complejo inmune. Luego agregue un sustrato cromogénico enzimático y una solución de parada para terminar la reacción. Finalmente, determinar cualitativa o cuantitativamente el contenido de la muestra analito por el color OD.
Crédito de imagen: https://www.biotekchina.com.cn/applications/elisa-and-related-immunoassays.html
(2) oro coloidal/inmunocromatografía de fluorescencia
Oro coloidal: consulte el sol de oro con el diámetro de partícula de fase dispersa entre 1 y 150 nm, y el color es rojo anaranjado a rojo púrpura.
Inmunocromatografía de oro coloidal: una técnica de detección que utiliza anticuerpos coloidales marcados con oro, use la membrana de nitrocelulosa (membrana NC) como portador de fase sólida para recubrir antígeno/anticuerpo, Y utiliza la acción capilar de la membrana NC para cromatografiar el líquido de un extremo de la membrana al otro extremo, al mismo tiempo, Se produce una reacción inmune durante la cromatografía.
Inmunocromatografía de Fluorescencia: una tecnología de detección inmunocromatográfica altera el oro coloidal en un etiquetado de microesferas fluorescentes.
Imagen de crédito: https://www.researchgate.net/figure/A-The-composition-of-colloidal-gold-test-strip-B-Principle-of-the-CG-test-strip_fig5_340176469
(3) inmunoensayo de quimioluminiscencia
Quimioluminiscencia: se refiere a la emisión de luz que acompaña al proceso de reacciones químicas.
Método de inmunoensayo de quimioluminiscencia: una técnica de detección que utiliza placas de múltiples pozos o partículas magnéticas como portadores sólidos para recubrir antígeno/anticuerpo, agregar analito y luminóforo para marcar antígeno/anticuerpo para formar un complejo inmunológico, después del lavado, estimule químicamente el complejo o sustrato para que emita luz y determine el contenido del analito por la intensidad de luminiscencia.
Crédito de la imagen: https:/www sepmag eu/blog/oferta/335317/-dos-clave-razones para seleccionar-quimioluminiscencia para inmunoensayos
(4) Clasificación de inmunoensayo de quimioluminiscencia
Clasificación por portador de recubrimiento: se divide en quimioluminiscencia de placas y quimioluminiscencia de partículas magnéticas. En la actualidad, se ha eliminado la quimioluminiscencia de la placa.
Clasificación por Luminiscencia: dividida en luminiscencia indirecta (enzimática), luminiscencia directa (éster de acridina, luminol) y electroquimioluminiscencia.
