Métodos de diagnóstico de viruela del simio
El virus de la viruela del mono (MPXV), la viruela y la vaccinia pertenecen al género del ortopoxvirus. El virus de la viruela del simio se transmite principalmente a los humanos por roedores, primates y otros animales salvajes, y tiene una transmisión limitada de persona a persona, lo que provoca una rara enfermedad zoonótica viral: la viruela del simio. El 1 de septiembre de 1970, se identificaron los primeros casos humanos de MPXV en el Hospital Basankusu del Congo. El virus de la viruela del simio se transmite principalmente a los humanos por roedores, primates y otros animales salvajes, y tiene una transmisión limitada de persona a persona, lo que provoca una rara enfermedad zoonótica viral: la viruela del simio. Los síntomas clínicos de la viruela del simio son similares a los de la viruela, pero los síntomas son más leves. La viruela del simio ocurrió principalmente en áreas remotas de África Central y occidental, donde está cerca de las selvas tropicales. Con la adaptación a los humanos, MPXV evolucionó gradualmente en dos clados: Rama de África Central (Cuenca del Congo) y Rama de África occidental. Entre ellos, la rama de la cuenca del Congo tiene una mayor virulencia y transmisibilidad.
Introducción a MPXV
El virus de la viruela del simio es un virus del ADN bicatenario envuelto, que depende mucho de la replicación del ADN y el RNA de las células huésped, y puede replicarse en el citoplasma del huésped. Similar a los virus del mismo género, es muy probable que MPXV replique el virus maduro intracelular (IMV) morfológicamente distinto y el virus envuelto extracelular (EEV) en el citoplasma del huésped. Los IMVs tienen una estructura física robusta que facilita la transmisión entre los huéspedes, mientras que los EEV más frágiles están envueltos y limitan el aclaramiento inmunológico del huésped. Por lo tanto, los EEV son más adecuados para la transmisión de virus a célula. MPXV puede infectar eficazmente los monocitos primarios humanos, eliminando las respuestas de las células T locales al inhibir la activación de las células CD4 y CD8, de modo que se evita la inmunosupresión sistémica y el control inmunológico.
Diagnóstico clínico del virus de la viruela del simio
Las mejores muestras diagnósticas para la viruela del simio provienen de lesiones cutáneas: Líquido de vesículas y pústulas, y costras secas. Las muestras de lesiones deben almacenarse en tubos secos y estériles (como VTM) y mantenerse frías. El diagnóstico clínico de la viruela del simio debe considerar otros trastornos de la erupción como la varicela, el sarampión, las infecciones bacterianas de la piel, la sarna, la sífilis y las alergias relacionadas con las drogas. Linfadenopatía en las primeras etapas de la enfermedad puede ser la única característica clínica que distingue la viruela del simio de la varicela o la viruela.
1. Microscopio electrónico biopsia
Bajo el microscopio electrónico, MPXV tenía forma de ladrillo en el citoplasma, con cuerpos laterales, y el Núcleo central tenía aproximadamente 200-300 nm de largo. Dado que las caracterizaciones OPV son morfológicamente indistinguibles, este método no puede confirmar el diagnóstico, pero puede sugerir que el virus pertenece al género Poxviridae.
2. Detección del gen
2,1. PCR cuantitativo de fluorescencia en tiempo Real
Detección de rutina de MPXV DNA en muestras clínicas y cultivos celulares infectados con MPXV, con PCR o método PCR en tiempo real. Se recomienda realizar la detección en una instalación de nivel 3 de bioseguridad. El método PCR en tiempo Real debe usarse para detectar el gen de la proteína de la envoltura externa (B6R), el gen de la polimerasa del DNA, la región conservada de E9L, la subunidad 18 de la polimerasa RNA dependiente del DNA, rpo18 y Gen F3L.
2,2. Polimorfismo de longitud de fragmentos de restricción (RFLP)
PCR o polimorfismo de longitud de fragmentos de restricción (RELP) también se puede utilizar para la detección de MPXV DNA, pero RFLP lleva mucho tiempo y requiere Cultivo de virus. RFLP de los productos PCR también requiere digestión seguida de electroforesis en gel, que puede no ser el mejor enfoque en entornos clínicos donde la velocidad, la sensibilidad y la especificidad son fundamentales.
2,3. Tecnología de secuenciación de próxima generación (NGS)
La secuenciación del genoma completo con el método NGS sigue siendo el estándar de oro para diferenciar la caracterización de MPXV y otros ortopoxvirus (OPV), pero la tecnología es costosa y el procesamiento posterior de los datos de secuenciación requiere una enorme potencia computacional. Por lo tanto, los NGS pueden no ser un enfoque apropiado en los países con recursos limitados de África subsahariana. El PCR en tiempo Real sigue siendo el método preferido para el diagnóstico de rutina de MPXV en la tecnología de pruebas genéticas, pero debe complementarse con tecnología de secuenciación del genoma en el sitio. Como el Minión de nanoporos de Oxford, proporciona datos del genoma viral en tiempo real, que es esencial para la intervención epidemiológica basada en la evidencia.
3. Inmuno ensayo
El ensayo inmunológico del virus de la viruela del mono incluye principalmente el ensayo inmunosorbente ligado a enzimas (ELISA) para detectar Anticuerpos IgG/IgM y la detección inmunohistoquímica de antígenos virales. El análisis inmunoquímico de los anticuerpos MPXV puede distinguirlo del virus del herpes. Los anticuerpos antivirales y las respuestas de las células T han sido víctimas de aumentar mientras se produce la aparición de la enfermedad, con el virus de la viruela del simio IgM e IgG detectados en el suero alrededor de 5 días después del inicio de la erupción y después de más de 8 días. Se debe diagnosticar una posible infección por MPXV si los anticuerpos IgM e IgG están presentes en el suero de personas no vacunadas con antecedentes de erupción cutánea y enfermedad grave. Una prueba de ELISA de IgM positiva indica una exposición reciente A MPXV, mientras que una prueba de IgG positiva indica que el individuo ha estado expuesto previamente a MPXV mediante vacunación o infección natural. La presencia de IgM e IgG en una muestra indica vacunación previa o exposición a individuos infectados naturalmente con MPXV. Sin embargo, los ortopoxvirus son serológicamente reactivos cruzados y los ensayos de antígenos y anticuerpos no proporcionan confirmación de la especificidad de la viruela del simio, pero pueden ser factibles para las pruebas serológicas en áreas endémicas de MPXV.
REferencia:
[1] Keasey Sarah, Christine Pugh, Alexander Tikhonov, et al. Base proteómica de la respuesta de anticuerpos a la infección por el Virus de la viruela del simio examinada en Macacos de Cynomolgus y una comparación con la vacunación contra la viruela humana [J]. Plos uno, 2010, 5(12): e15547.
[2] Emmanuel Alakunle Ugo Moens Godwin Nchind et al, Virus Monkeypox en Nigeria: infección biología de epidemiología y la evolución [J] Virus, 2020, 12(11):1257.
